病原体的检查、培养和分离

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病原体的检查、培养和分离(examination,culture and isolation of pathogen),传染病由各种病原体引起,在病人体内及其排泄物中找到病原体,对传染病的诊断及治疗具有重要意义。特别是早期诊断意义更大,因为在病程早期,病人体内的病原体多,检测的阳性率高,病程后期,人体产生免疫力,病原体被消灭,检测的阳性率降低。但要注意标本来源不同,病原体阳性的诊断意义也不同。如从发热病人血中培养出伤寒杆菌,即可确诊伤寒;而从其粪便中培养出伤寒杆菌就不可能百分之百地肯定为伤寒,因为伤寒杆菌的携带者也可由其他疾病而引起发热。此外,病原体检测对指导治疗也非常重要,可以根据检测结果选用适当的药物治疗,尤其是培养阳性者,药物敏感试验可指导医生选用有效药物。检测病原体的方法包括直接检查、培养和分离。

直接检查

简单易行、快速、准确。可将标本制成涂片染色(或不染色)后,直接在显微镜下检查病原体。但只有在病原体较大时才能用普通光学显微镜查到,如病毒太小,普通显微镜看不到,不能用这种检查方法。有些病原体即使在普通显微镜下能见到,但单纯从形态上很难与其他微生物相鉴别,必须用特殊染色方法,如白喉杆菌类白喉杆菌只有用特殊染色(庞德氏染色等)才能区别。引起猩红热的乙型溶血性链球菌在形态上无法与其他链球菌鉴别,而又无特殊染色,因此不能用直接检查法进行检查。免疫荧光检查就是一种特殊染色法,原理是将特异性抗体标记荧光素,涂片上若有相应的病原体,带荧光素的特异性抗体就与之结合,在荧光显微镜下便可以看到发黄绿色荧光的病原体。应用免疫染色法检查粪便中的痢疾杆菌,可将其与大肠杆菌鉴别,这也是一种直接检查法。

培养和分离

虽较直接检查法为慢,且较为复杂,但更准确,应用范围也更广,几乎可用于所有的病原体。一般除病毒、衣原体立克次氏体外,都可用无生命的培养基培养和分离。培养基的种类很多,可根据不同的病原体加以选用。培养分离病原体后,还可进行各种试验,如发酵试验、毒力试验等,这对病原体的进一步鉴定非常重要。病毒、衣原体和立克次氏体缺乏维持生命所必须的各种酶,不能像细菌那样从培养基中摄取营养物质,利用自己的酶来合成自己所需的各种成分,不能用无生命的培养基培养,而必须接种到有生命的机体内,利用机体的酶来合成它们所需的各种成分。这种方法称“病毒分离”、“衣原体分离”或“立克次氏体分离”。分离的方法一般有三种:①组织培养。最简单常用;②动物胚胎(如鸡胚、鸭胚)接种;③动物接种,如接种小白鼠豚鼠等。不同的病毒、衣原体或立克次氏体常需要不同的分离方法,分离阳性后也常需进行各种试验(如血清学试验等)才能最后判定其种类。病原体的直接检查常与病原体的培养分离同时进行。

除上述两种方法外,还有一些特殊的检查方法。例如对怀疑为狂犬病的人或动物可取其脑组织检查特异性包涵体内格里氏小体)确诊;检查乙型肝炎表面抗原可用反向被动血凝法(RPHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及放射免疫试验(RIA)等方法;检查粪便中的甲型肝炎病毒可用免疫电镜等。还可应用分子杂交核酸分析的方法来检验病人血液、组织或排泄物中的病原体核酸以协助诊断,如血液中及肝组织中的乙型肝炎病毒核酸,就可用分子杂交的方法检测;粪便中的轮状病毒可用核酸分析的方法来检测等。由于病原体的各种抗原和病原体的核酸都是病原体的特异性成分,因此如果它们出现阳性也就表示病原体阳性,故这些方法也具有很大的确定诊断的意义。