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<div class="medical-infobox">
{| style="width: 100%; background: none; border-spacing: 0;"
|+ style="font-size: 1.25em; font-weight: bold; margin-bottom: 12px; color: #2c3e50;" | HLA 分型技术演变
|-
| colspan="2" | 
<div class="infobox-image-wrapper">

<div style="font-size: 0.8em; color: #9ca3af; margin-top: 10px; font-weight: normal;">从血清学到高通量测序的分辨率提升</div>
</div>
|-
! style="text-align: left; padding: 10px 0; border-bottom: 1px solid #f3f4f6; color: #4b5563;" | 第一代
| style="padding: 10px 0; border-bottom: 1px solid #f3f4f6; font-weight: 600;" | 血清学 / 细胞学
|-
! style="text-align: left; padding: 10px 0; border-bottom: 1px solid #f3f4f6; color: #4b5563;" | 第二代
| style="padding: 10px 0; border-bottom: 1px solid #f3f4f6;" | PCR-SSP / PCR-SSO
|-
! style="text-align: left; padding: 10px 0; border-bottom: 1px solid #f3f4f6; color: #4b5563;" | 第三代 (金标准)
| style="padding: 10px 0; border-bottom: 1px solid #f3f4f6;" | SBT (Sanger 测序)
|-
! style="text-align: left; padding: 10px 0; color: #4b5563;" | 最新一代
| style="padding: 10px 0;" | NGS (高通量测序)
|}
</div>

'''HLA 检测技术演进'''反映了临床医学对免疫识别精度需求的不断提升。从早期的仅能区分抗原类别（低分辨），发展到如今能精确读取碱基序列（高分辨），技术的迭代直接提高了器官移植的存活率和肿瘤免疫治疗的有效性。

目前，临床上根据需求不同，通过低、中、高三种分辨率的手段并存，但 NGS 技术正逐渐成为精准医疗的主流选择。

== 技术迭代路线图 ==
HLA 分型技术经历了从蛋白质水平到基因水平，再到全基因组水平的三个阶段：

<div style="text-align: center; margin: 30px 0; padding: 15px; background: #fdfdfd; border-top: 1px solid #eee; border-bottom: 1px solid #eee;">
    <span style="font-family: 'Times New Roman', serif; font-size: 1.1em; color: #64748b;">血清学 (CDC)</span>
    <span style="margin: 0 10px; color: #cbd5e1; font-size: 1.3em;">→</span>
    <span style="font-family: 'Times New Roman', serif; font-size: 1.1em; color: #d97706;">PCR 分子法 (SSP/SSO)</span>
    <span style="margin: 0 10px; color: #cbd5e1; font-size: 1.3em;">→</span>
    <span style="font-family: 'Times New Roman', serif; font-size: 1.1em; color: #059669;">SBT 测序</span>
    <span style="margin: 0 10px; color: #cbd5e1; font-size: 1.3em;">→</span>
    <span style="font-family: 'Times New Roman', serif; font-size: 1.1em; font-weight: bold; color: #2563eb;">NGS 全长测序</span>
</div>

== 各阶段技术客观评价 ==

=== 1. 血清学与细胞学方法 (已淘汰/辅助用) ===
早期主要利用微量淋巴细胞毒试验 (CDC)。
* '''原理'''：利用抗原-抗体反应来判断 HLA 类型。
* '''局限'''：只能达到“低分辨”水平（2位数字），无法区分基因亚型，且需要活细胞，样本保存困难。目前主要用于移植前的最终交叉配型，而非定型。

=== 2. PCR 分子生物学方法 (SSP/SSO) ===
随着 PCR 技术的普及，基于 DNA 的分型成为主流。
* '''PCR-SSP''' (序列特异性引物)：引物特异性扩增，扩增出来即阳性。速度极快，适合急诊器官移植（如尸体肾移植）。
* '''PCR-SSO''' (序列特异性寡核苷酸探针)：适合大规模样本初筛（如骨髓库入库）。
* '''客观评价'''：虽然比血清学准，但通常只能达到“中低分辨”，无法解决相位模糊（Phase Ambiguity）问题。

=== 3. SBT 直接测序法 (曾经的金标准) ===
基于 Sanger 测序原理的 Sequence-Based Typing。
* '''优势'''：可以直接读取外显子序列，达到“高分辨”（4位数字）。
* '''缺陷'''：由于 Sanger 测序读长限制，且双链同时测序，常常出现“模棱两可”的碱基读取，需要依靠软件推测，无法覆盖内含子信息。

=== 4. NGS 高通量测序 (当前前沿) ===
利用边合成边测序（SBS）或单分子测序技术。
* '''优势'''：
** '''超高分辨'''：可提供 6-8 位甚至全基因组序列。
** '''全覆盖'''：覆盖全长基因（含内含子和非翻译区），彻底解决了等位基因模棱两可的问题。
** '''通量大'''：一次可检测数千个样本。
* '''挑战'''：实验周期相对 PCR 方法较长，数据分析对生物信息学算法要求极高<ref>Hosomichi K, et al. The impact of next-generation sequencing technologies on HLA research and diagnostics. Journal of Human Genetics. 2015.</ref>。

== 技术参数对比 ==

<center>
{| class="wikitable compact-table"
|+ 主流 HLA 分型技术客观参数对比
|-
! style="background: #f8f9fa;" | 技术指标 !! PCR-SSP !! PCR-SBT !! NGS
|-
| '''分辨率''' || 低-中分辨 (2位) || 高分辨 (4位) || 超高分辨 (6-8位)
|-
| '''检测通量''' || 低 (单样本) || 中 || 极高
|-
| '''相位模糊''' || 无法解决 || 部分存在 || '''彻底解决'''
|-
| '''适用场景''' || 急诊移植配型 || 常规临床确诊 || 骨髓库详查、肿瘤疫苗研发
|}
</center>

== 参考文献 ==
{{reflist}}

<div style="clear: both; margin-top: 40px; border: 1px solid #a2a9b1; background-color: #f8f9fa; border-radius: 4px; overflow: hidden;">
<div style="background-color: #dee2e6; text-align: center; font-weight: bold; padding: 6px; border-bottom: 1px solid #a2a9b1; color: #374151;">分子诊断技术导航</div>
{| style="width: 100%; background: transparent; border-spacing: 0; font-size: 0.9em;"
|-
! style="width: 15%; padding: 8px; background-color: #f1f5f9; text-align: right; border-bottom: 1px solid #fff;" | 基础技术
| style="padding: 8px; border-bottom: 1px solid #fff;" | [[PCR]] • [[Sanger测序]] • [[电泳]] • [[探针杂交]]
|-
! style="width: 15%; padding: 8px; background-color: #f1f5f9; text-align: right; border-bottom: 1px solid #fff;" | 高通量技术
| style="padding: 8px; border-bottom: 1px solid #fff;" | [[NGS]] • [[全外显子测序]] • [[单细胞测序]]
|-
! style="width: 15%; padding: 8px; background-color: #f1f5f9; text-align: right;" | 应用场景
| style="padding: 8px;" | [[HLA配型]] • [[肿瘤基因检测]] • [[伴随诊断]]
|}
</div>

[[Category:生物技术]]
[[Category:分子诊断]]
[[Category:遗传学]]