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医学遗传学/Southern印迹法
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{{Hierarchy header}} 基本原理是:[[硝酸纤维膜]]或[[尼龙]]滤膜对[[单链DNA]]的吸附能力很强,当电泳后[[凝胶]]经过[[DNA]]变性处理,覆以上述滤膜,再于其上方压上多层干燥的吸水纸,借助它对深[[盐溶]]液的上吸作用,凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的,即DNA片段的位置保持不变。转移结束后,经过80℃烘烤的DNA,将原位地固定于膜上。 {{图片|gv215ayu.jpg|Southern印迹杂交示意图}} 图13-6 Southern印迹杂交示意图 当含有特定[[基因]]片段已原位转移到膜上后,即可与[[同位素标记]]了的[[探针]]进行杂交,并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行,袋内放置上述杂交滤膜,加入含有变性后探针的杂交溶液后,在一定温度下让[[单链]]探针DNA与固定于膜上的单链基因DNA[[分子]]按[[碱基]]到互补原理充分结合。结合是特异的,例如只有β[[珠蛋白]]基因DNA才能结合上β珠蛋白的探针。杂交后,洗去膜上的未组合的探针,将Ⅹ线胶片覆于膜上,在暗盒中日光进行[[放射自显影]]。结合了同位素标记探针的DNA片段所在部位将显示黑色的杂交带,基因的缺失或[[突变]]则可能导致带的缺失或位置改变。 [[分子杂交]]是基因探测的基础,除了用印迹杂交外,还有[[斑点杂交]]法。即将DNA样品变性后直接点在[[硝酸]]纤维滤膜上,再与探针杂交,或者将[[细胞]]或[[病毒]]点在膜上,[[菌落]]或[[菌斑]]原位地吸附在膜上,经过变性处理,再进行杂交。斑点杂交多用于[[病原体]]基因,如[[微生物]]的基因,但也可用于检查人类基因组中的DNA序列。 {{Hierarchy footer}} {{医学遗传学基础图书专题}}
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