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基因诊断与性病/核酸探针的标记和检测
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{{Hierarchy header}} [[分子杂交]]是[[核酸]]链以[[碱基配对]]规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记,这条链就称为核酸[[探针]]。因此,核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。[[放射性同位素]]标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。常用的放射性同位素有32P和35S。32P因其能量高,信号强,所以最常用。放射性同位素标记探针虽然敏感度高,但却存在[[辐射]]危害和半衰期限制(32P半衰期为14.3天,35S半衰期为87.1天,125I半衰期为60天),3H的半衰期长达12.3年,但它所释放β[[射线]]的能量太低,只能用于组织[[原位杂交]]。由于[[同位素标记]]的探针在使用过程中存在着上述缺点,近年来,人们在寻找非放射性[[标记物]]方面取得了很大进展。国内已具备[[生物素]]类标记物的生产能力,并有相应[[试剂]]出售。目前非放射性标记物有下述几类:金属如Hg、荧光物质如F2[[TC]]、[[半抗原]]如[[地高辛]]、生物素、[[酶类]]如[[辣根]]过氧化物酶(HRP)、[[半乳糖苷酶]]或[[碱性磷酸酶]]([[AKP]])等,不同的标记物,所标记探针的方法及检测方法也各异。 核酸探针的常用酶促标记技术有:[[缺口平移]];[[DNA]]快速[[末端标记]];用[[T4]][[多核苷酸]][[酶标记]]DNa5'末端,随[[引物延伸]];[[聚合酶链反应]]。 核酸探针的非放射性标记技术有:光促生物素标记核酸、酶促生物素标记核酸、[[寡核苷酸]]的生物素末端标记、酶标DNA、酶标寡核苷酸、DNA半抗原标记。 {{Hierarchy footer}} {{基因诊断与性传播疾病图书专题}}
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