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尖锐湿疣
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==诊 断== 1、典型皮损为生殖器或肛周等潮湿部位出现[[丘疹]],乳头状、菜花状或[[鸡冠]]状肉质赘生物,表面粗糙角化。 2、[[醋酸白试验]]阳性,活体检测可见类似[[糜烂]]图样,中间鲜红至褐色,四周色泽逐渐减淡。 3、[[核酸]]杂交可检出HPV-DNA相关序列,PCR检测可见特异性HPV-DNA[[扩增]]区带。 4、患者多有不洁性生活史或配偶感染史,少数尖锐湿疣通过接触污染的用具感染,[[新生儿]]亦可通过产道受感染。 潜伏期1~8个月不等,平均为3个月。 5、尖锐湿疣HPV病毒不溶于血液,但可以通过检测血液中[[血清抗体]],来得到感染病毒的信息。通过先进病毒检测系统,能迅速化验[[血清]],检测三项,即“[[病毒抗体]]、病毒类型、病毒数量”。 ===自 查=== 人体感染了人类乳头瘤病毒后大约经过半个月至8个月,平均为3个月的潜伏期后才发病,由于尖锐湿疣初起时常不痛不痒,皮疹也不明显。多数患者一般无症状。尖锐湿疣如果能早发现,早治疗,问题就简单的多。疣体不大,用[[物理]]方法,直接将疣体去掉即可,这样对患者来说也无多大痛苦。如发现太迟,或不及时进行治疗,导致疣体长得较大或广泛发展的时候,通常需要经过多次治疗,才可以将疣体完全去除。这样的话,治疗起来就比较麻烦,病人也备受痛苦,并且也容易导致尖锐湿疣反复发作,不利于早日[[康复]]。 男性尖锐湿疣通常好发于冠头沟、包皮内、肛门周围。起初为小淡红色丘疹,以后逐渐增大增多,表面凹凸不平,湿润柔软,突起像菜花样、晕样或乳头样,污灰色或红色,触之易出血,常发生糜烂,渗液、自觉瘙痒,如有脓性分泌物会散发恶臭。这是一种可致癌的性病。 所以若有患上尖锐湿疣,一定要积极治疗,彻底根治。找专科医师治疗是最佳的选择,否则不适当的治疗和刺激可加快恶变。 ===诊疗规范=== 1、诊断标准:[[接触史]],有非婚性接触史、配偶感染史或间接感染史。 2、[[实验室检查]]:皮损活检,有HPV感染的特征性凹空[[细胞]]的[[组织病理学]]变化特点。 必要时在皮损活检中用[[抗原]]或核酸检测显示有HPV。常见的是HPV6、11型,少见为HPV16、18型。 3 、病例分类:[[报告病例]],具备1.1及1.2指标。[[确诊病例]],具备1.1,1.2及1.3中的任何一项指标。 4、治疗原则:注意患者是否同时有[[淋球菌]]、[[衣原体]]、[[支原体]]、[[滴虫]]、霉菌等病原体感染,如有,应同时治疗。 患者配偶与性伴若有尖锐湿疣或其他性病,应同时治疗。治疗期间避免性生活。 5、判愈及预后:判愈标准是去除增生疣体,尖锐湿疣预后一般良好,但复发率较高。 6、管理及预防:尖锐湿疣每例患者只应报告一次。过去未曾诊断的患者首次诊断时应当报告。 尖锐湿疣患者应避免性生活,或使用[[避孕套]],以防传染给配偶。患者应及早治疗。严格遵守一夫一妻制是预防本病的最佳方法。 ===辅助检查=== 一、醋酸白试验 用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟,病灶部位变白稍隆起,肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是[[蛋白质]]与酸凝固变白的结果,HPV感染细胞产生的[[角蛋白]]与正常的未感染上皮细胞产生的不同,只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高,它比常规检测观察[[组织学]]变化还好。但偶尔在上皮增厚或[[外伤]]擦破病例中出现[[假阳性]]、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示,醋酸白试验并不是特异试验,且假阳性较常见。 二、[[免疫]]组织学检查 常用[[过氧化物酶抗过氧化物酶]]方法(即PAP),显示湿疣内的[[病毒蛋白]],以证明疣损害中有病毒抗原。HPV[[蛋白]]阳性时,尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。 三、[[组织化学]]检查 取少量病损组织制成[[涂片]],用特异抗人类乳头瘤病毒的[[抗体]]作[[染色]]。如病损中有病毒抗原,则[[抗原抗体结合]]。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成红色。此法特异性强且较迅速,对诊断有帮助。 四、病理检查 主要为角化不全,[[棘层]]高度肥厚,乳头瘤样增生,[[表皮突]]增厚,延长,其增生程度可似假性上皮瘤样。[[刺细胞]]和基底细胞并有相当数量的[[核分裂]]、颇似[[癌变]]。但细胞排列规则,且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大,胞浆着色淡、中央有大而圆,深[[嗜碱性]]的核。通常[[真皮]]水肿、[[毛细血管扩张]]以及周围较致密的慢性炎性[[浸润]]。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣,[[表皮]]极度向下生长,代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混,故须多次活检。若有缓慢发展之倾向, 则为一种低度恶变的过程,即所谓[[疣状癌]]。 五、[[基因诊断]] 迄今,HPV难于用传统的[[病毒培养]]及[[血清学]]技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。 (一)[[标本]]的采集及处理 1、标本的采集和[[预处理]]:用刮板或[[生理盐水]]浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作[[细胞学]]检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%[[硫柳汞]]的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提DNA。 2、标本核酸的提取:按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/L EDTA,150mmol/L NaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml[[蛋白酶]]K)37℃下处理过夜;且等体积酚/[[氯仿]](1:1),氯仿/异[[戊醇]](24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积[[无水乙醇]]置-20℃ 2h或过,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃[[温育]]30min。 (二)PCR扩增 1、 [[引物]]设计和合成:HPV[[基因组]]可分为早期区(E)和[[晚期]]区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有[[保守序列]]。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。 2、PCR反应[[试剂]]:Taq DNA[[聚合酶]](2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR[[缓冲液]](500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,[[灭菌]]的玻璃[[蒸馏器]]制备的[[蒸馏水]]。 3、PCR扩增方法和程序:以100μl PCR反应液,用[[无菌]]0.5ml[[硅化]]塑料[[离心管]]为反应管进行扩增反应。 (1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。 (2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。 (3)加入80-100μl[[石蜡油]],在台式[[离心机]]上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,PCR试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。 (4)将反应管置PCR扩增仪上,循环参数为95℃ 30s,55℃ 40s,72℃ 50s循环35次,最后72℃延伸5min。 4、每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的[[重组质粒]](每反应为100pg)或含有HPV的[[细胞系]](如Caski、HeLa)DNA为阳性对照,以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。 (三)扩增产物的检测和分析 1、[[凝胶电泳]]:扩增反应结束后,取出反应管,冷却至室温,取10μl扩增产物用5%-7%[[聚丙烯酰胺凝胶]]或1.5%[[琼脂糖]]电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的DNA带。 2、核酸杂交:如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合[[探针]]和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、[[斑点杂交]]验证。 按照标准方法制32P ATP标记的[[寡核苷酸探针]],需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h,随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜,除去多余探针。然后进行洗膜,其条件依所用探针而异:公用混合探针,55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针,56-57℃下10 min,并换液重洗1次;MY14及WD74探针,58-59℃下10min,亦换液重洗1次。 用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高,GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果,可检出标本中200个拷贝的HPV DNA,若以核酸杂交检测PCR产物,敏感性提高,能检出10个拷贝的HPV DNA。 鉴于PCR技术的高度敏感性,以[[生殖]]道脱落细胞为检材足以满足试验要求,避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下,PCR扩增产物经凝胶电泳,观察产生的DNA可直接作出诊断。因此,PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。
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