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[[弗氏佐剂]](Freundadjuvant),这是目前最常用于动物实验的[[佐剂]],它是将[[抗原]]水溶液与[[油剂]]([[石蜡油]]或[[植物油]])等量混合,再加[[乳化剂]]([[羊毛脂]]或叶[[吐温]]80)制成油包水抗原[[乳剂]],称之为不完全弗氏佐剂。如在不完全佐剂中加入[[分枝杆菌]](如死卡苗)则称为完全弗氏佐剂。 弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂,分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是[[液体石蜡]]与羊毛脂混合而成,组分比为1~5:1,可根据需要而定,通常为2:1。不完全佐剂中加[[卡介苗]](最终浓度为2~20mg/ml)或死的[[结核分枝杆菌]],即为完全弗氏佐剂(FCA)。 一般首次注射时用1/2体积FCA加上1/2体积的抗原进行[[乳化]],第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂,则抗原量增大10-20倍。 配制方法:按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用[[超声波]]使之混匀,[[高压灭菌]],置4℃下保存备用。 在[[免疫]]动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成 "油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化[[复合物]],注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及[[免疫原性]]及免疫动物不同而有一定差异,无统一标准和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg。佐剂与抗原乳化可按如下方法进行: (1) [[研磨法]]:先将佐剂加热并取适量放入[[无菌]]的玻璃[[研钵]]内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上[[粘附]]大量乳剂,抗原损失较大。 (2) [[注射器]]混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到[[无菌操作]],抗原损失少,适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全,个别抗原,用塑料注射器根本推不动,而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包[[水剂]]。 (3) [[超声]]:实验室条件好点的,比如说有[[超声破碎]]仪的,一定要控制超声频率和时间,超声容易激发一些[[自由基]],对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。 ==其他[[免疫佐剂]]的物质== 弗氏佐剂也属于免疫佐剂。其他免疫佐剂的物质有:①微生物及其产物,常用的微生物有分枝[[杆菌]]、[[短小棒状杆菌]]、[[百日咳杆菌]]以及处左兰氏阴性杆菌的提取物[[脂多糖]],自分枝杆菌的提取物质[[胞壁酰二肽]]等。②多聚[[核苷酸]],如多聚[[肌苷酸]]:[[胞苷酸]](poly1:C),[[多聚腺苷酸]](poly1:A:μ)等;。③无机物,如[[明矾]]及氢化铝等。 佐剂的作用机制尚不完全清楚:①它可能增加抗原的表面面积,易为[[巨噬细胞]]所吞噬;②延长抗原在体内的存留期,增加与[[免疫细胞]]接触的机遇;③诱发抗原注射部位及其[[局部淋巴结]]的[[炎症反应]],有利于刺激免疫细胞的[[增殖]]作用。 [[分类:生物化学]][[分类:免疫医学]]
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