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组织学/几种特殊显微镜的应用
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{{Hierarchy header}} 1.[[荧光显微镜]] 荧光显微镜(fluorescence microscope)是用来观察[[标本]]中的[[自发荧光]]物质或以[[荧光素]][[染色]]或标记的[[细胞]]和结构。荧光显微镜是以[[高压]]汞灯产生的[[短波紫外线]]为光源,并配有激发、阻断、吸热和吸收[[紫外线]]等滤片系统,标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜色的荧光,借以研究该荧光物质在细胞和组织内的分布。组织中的自发性荧光物质如神经细胞和[[心肌细胞]]等内的[[脂褐素]]呈棕黄色荧光,肝贮[[脂细胞]]和[[视网膜色素]]上皮细胞内的[[维生素A]]呈绿色荧光,某些[[神经内分泌]]细胞和[[神经纤维]]内的[[单胺]]类物质([[儿茶酚胺]]、[[5-羟色胺]]、[[组胺]]等)在[[甲醛]]作用下呈不同颜色的荧光,组织内含有的[[奎宁]]、[[四环素]]等药物也呈现一定的荧光。细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光,如溴化乙锭与[[吖啶橙]]可与[[DNA]]综合,进行细胞内DNA含量测定。荧光显微镜更广泛用于[[免疫细胞化学]]研究,即以异硫氰酸或[[罗丹明]]等荧光素标记[[抗体]](一抗或二抗),用该标记抗体直接或间接地与细胞内的相应[[抗原]]结合,以检测该抗原的存在与分布。 2.[[相差显微镜]] 相差显微镜(phase contrast microscope)是用于观察[[组织培养]]中活细胞形态结构的。活细胞无色透明,一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用,转换为光密度差异(明暗差),使镜下结构反差明显,影像清楚。组织培养研究常用的是倒置相差显微镜(inverted phase contrast microscope),它的光源和聚光器在载物台的上方,[[物镜]]在载物台的下方,便于观察贴附在培养器皿底壁上的活细胞。 3.暗视野[[显微镜]] 暗视野显微镜(dark-field microscope)主要用于观察因反差或[[分辨力]]不足的微小颗粒。此种显微镜主要是有一个暗视野集光器,使光线不直接进入物境,故呈暗视野。而标本内的小颗粒产生的衍射光或[[散射]]光进入物镜,暗视野中的颗粒呈明亮小点,如同在暗室可见一束光线中的微小尘粒一般。普通通光镜最大分辨率为0.2μm,暗视野显微镜则可分辨0.004~0.2μm的微粒,适用于观察细胞内[[线粒体]]运动及标本中[[细菌]]等微粒的运动等。 4.共集[[激光扫描]]显微镜 共焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以[[激光]]为光源,光束经[[聚焦]]后落在样品(组织厚片或细胞)不同深度的微小一点,并作移动扫描,通过电信号彩色显像,经过微机图像分析系统进行二维和三维分析处理。CLSM可对细胞进行三维结构图像分析,细胞内各种[[荧光标记]]物的微量分析,细胞内[[Ca]]<sup>2+</sup>、pH值等的动态分析测定,细胞的[[受体]]移动、[[膜电位]]变化、[[酶活性]]和物质转运的测定,并以激光对细胞及其[[染色体]]进行切割、分离、筛选和克隆。因此,CLSM是一种高技术产品,可对细胞的多种功能进行全自动、高效、快速的微量定性和定量测定。 其他如[[偏光显微镜]]用于研究组织[[晶体]]物质及[[纤维]]等的光学性质,[[紫外光显微镜]]用于研究细胞内[[核酸]]的分布与定量等。 {{Hierarchy footer}} {{组织学图书专题}}
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