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==肿瘤细胞-培养方法== <b>一、机械刮除法</b> 1.<b>标记</b>:镜下观察,用不脱色笔在[[培养瓶]]皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。 2.<b>刮除</b>:弃掉[[培养液]],把[[无菌]]胶刮伸入瓶皿中,肉眼或[[显微镜]]窥视下,刮除无标记空间。 3.用Hanks液冲<b>清洗</b>一两次,洗除被刮掉的细胞。 4.注入培养液继续<b>培养</b>,如发现仍有成纤维细胞残留,可重复刮除至完全除掉为止。 <b>二、反复帖壁法</b> 1.待细胞生长达一定数量后,倒出旧培养液,用[[胰酶]][[消化]]后,Hanks冲洗2次,加入不含[[血清]]的培养液,吹打制成细胞悬液。 2.取编号为A、B、C三个培养瓶。首先把悬液[[接种]]入A培养瓶中,置温箱中静止培养5~20分钟后,轻轻倾斜培养瓶,让液体集中瓶角后慢慢吸出全部培养液,再接种入B培养瓶中后,向A瓶中补充少许完全培养液置温箱中继续培养。 3.培养B瓶中细胞5~20分钟后,按处理A的方法,把培养液注入C培养瓶中,再向B瓶补加完全[[培养基]]。 <b>三、消化排除法</b> 1.先是用0.5%[[胰蛋白酶]]和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培养基细胞一次,然后再换成新的混合继续消化,并在[[倒置显微镜]]下窥视和不时摇动培养瓶,到半数细胞脱落下来后,便立即停止消化。 2.把消化液吸入[[离心管]]中,离心去上清,吸入另瓶中,加培养液置温箱中培养,向原瓶内也补加新的培养液继续培养。用此法处理后,成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落,经过几次反复处理,可能把成纤维细胞除净。 <b>四、[[胶原酶]]消化法</b> 1.可用0.5mg/ml的胶原酶消化处理,边消化边在倒置显微镜下窥视,当发现成纤维细胞被除掉后,即终止消化。 2.用Hanks洗涤处理一次后,更换新培养液,继续培养,可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净,可再次重复。
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